聊聊细胞分离和培养那些事儿
转自生物在线 来源： 北京索莱宝科技有限公司 2019-9-2
细胞培养是生命科学研究的重要方法之一。同时，在原代细胞培养的过程中，首要任务是从组织中分离细胞。但看似简单的细胞分离和培养技术，却不知难倒了多少英雄好汉。下面索莱宝和大家聊聊细胞分离与培养那些事儿。
如何分离细胞？
从原代组织中分离细胞，将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。然而，为了更好地测定细胞免疫功能，我们需要从动物外周血或组织中获取有活性的细胞，如淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等。分离这类免疫细胞的方法有：密度梯度离心法、黏附分离法、流式细胞仪分离法等其他分离法。目前常用的是密度梯度离心法。索莱宝细胞分离液产品的研发原理就是基于不同细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布。
具体怎么实现呢？
以分离人外周血淋巴细胞为例：
- 取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。
- 在离心管中加入适量分离液，将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意保持两液面界面清晰。
- 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min。
- 离心后将出现明显的分层：上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。
- 小心地吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g，离心10min。
- 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。
- 重复步骤6。
- 弃上清，细胞重悬备用
细胞分离时别忘了做到这些！
无菌操作：在样品收集和分离过程中，应注意无菌操作，避免微生物污染。
保证新鲜：血液样本为新鲜抗凝血（采血2 h以内），避免冷冻和冷藏，优抗凝剂选择为EDTA、枸橼酸和肝素。
分离液的保存：分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。
细胞稀释及细胞洗涤液：稀释或洗涤细胞不可使用含钙离子、镁离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。
注意添加顺序：样品在上，分离液在下，保持两液面界面清晰。
离心管：选用玻璃材质离心管。部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
离心：血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索分离条件。
如何选择细胞分离液产品？
1. 要有针对性地选择产品。不同细胞的密度与体积是不同的，不同种属动物细胞的密度也是不同的。索莱宝针对不同客户科研需求，研发了不同种细胞的分离液，如：淋巴细胞分离液、粒细胞分离液、白细胞分离液和单个核细胞分离液；针对不同种属动物，研发了不同动物的细胞分离液，如：人、小鼠、大鼠、鸡、兔、牛、狗等等。同时，索莱宝细胞分离液系列产品满足了外周血、组织脏器、骨髓等不同样品的分离。索莱宝丰富多样的产品满足了客户的多种科研需求。
2. 要选择分层效果明显的产品。索莱宝细胞分离液产品，性价比高，分层效果明显。以人外周血淋巴细胞分离液为例，索莱宝分离液产品分离的白膜层非常清晰，而且白膜层没有弥散，效果优于其他品牌同类产品。
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细胞培养要注意哪些？
无菌的环境与操作：在细胞培养的过程中，应保持无菌的实验环境并进行无菌操作。
培养液的选择：每种细胞应该选择适合它的培养液。索莱宝的多种细胞培养液产品满足了不同细胞的需求。
温度与pH值的监控：一般选择37℃和5% CO2培养体系。细胞培养液偏黄色的时候应及时更换培养液。
预热培养液：为了使细胞更好地贴壁，应注意提前预热培养液。
避免培养液暴露在荧光下：平时应注意将培养液储存在黑暗的环境中，荧光（紫外光）对于培养液（有细胞或无细胞）有不利影响。
传代接种密度：在细胞传代的过程中要保证合适的接种密度。通过细胞计数来控制细胞传代的接种密度。同时，要注意观察细胞的状态和生长速度。
避免细胞损伤：在细胞消化传代时，应注意胰蛋白酶的浓度以及消化的时间。轻柔地吹打细胞，避免机械损伤，选择适当的离心力。
细胞冻存与复苏：冻存液中要加入保护剂：甘油或二甲基亚砜（DMSO）。冻存时要进行梯度降温。细胞复苏选择在37℃的水溶液中进行，解冻细胞速度要快。解冻后，细胞冻存管外壁要用纸擦干，避免污染。
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感恩有你，真情回馈。索莱宝为答谢广大客户的支持，2019.7.1-8.15期间进行细胞分离液买二送一活动！助力科研，品质值得信赖！心动不如行动，机会千载难逢，还不快快下单！
总得来说
细胞分离和培养是个细致活
方方面面都需您注意
希望这些要点可以帮助到您！
索莱宝愿陪在您身边，助您成功！
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