技术概述
Small RNA(包括miRNA、ncRNA、siRNA、snoRNA、piRNA、rasiRNA等)是一大类调控分子,几乎存在于所有的生物体中。
Small RNA通过mRNA降解、翻译抑制、异染色质形成以及DNA去除等作用途径,在基因表达调控、生物个体发育、代谢紊乱及疾病发生和发展等生理过程中发挥重要作用。miRNA 是一类内源性的、长度约 18-25 nt、具有调控功能的非编码 RNA,通过和靶基因碱基配对引导沉默复合体降解 mRNA 或阻碍其翻译。Small RNA 测序技术不受物种限制,既能鉴定特定条件下表达的 miRNA,又能预测发现新的 miRNA,对于疾病的发生发展研究有重要意义。
技术详情
因为 miRNA 序列比较短,彼此间相似度又非常高,尤其是同一家族的 miRNAs,彼此间可能只有 1 个碱基差异,出现非特异性扩增是很正常的,建议使用 Taqman 探针法进行尝试。
进行生物信息分析时,针对有参考基因组样本,以该物种的基因组以及该物种的 miRBase 数据库为参照进行数据分析;如果没有参考基因组,可以近缘物种的基因组以及近缘物种的 miRBase 数据库为参考,或者动物样本以所有动物的 miRBase 数据库、植物样本以所以植物的 miRBase 数据库为参照进行比对分析。
为防止 small RNA 丢失,浪费样本、时间和精力,抽提 total RNA 时请使用 miRNA Homogenate Additive。如果同一份样本同时检测 mRNA/lncRNA 和 small RNA,请事先告知该区域负责的销售工程师,请公司抽提人员注意保留 small RNA。
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