技术概述
凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。是检测蛋白质与DNA的相互作用的常用技术,可用于分析转录因子、DNA修饰蛋白等与目标DNA片段的结合。
基于DNA-蛋白质或RNA-蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理,依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物,当蛋白质(转录因子)与特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合蛋白质的DNA或RNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。
这一技术最初用于研究DNA结合蛋白质,目前已用于研究RNA结合蛋白质和特定的RNA序列的相互作用。竞争实验中采用含蛋白质结合序列的DNA或RNA探针,和其它相关的探针,来确定它们相互作用的特异性及强度。
技术详情
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