运用成熟的实时定量PCR技术准确、快速地定量检测各种组织、原代细胞及细胞系中目的miRNA的表达情况。

MicroRNA(miRNA) 是一类长度约19-24nt的非编码单链RNA，通过碱基互补配对的方式与靶基因的3′-UTR区部分或完全互补，剪切靶基因的转录产物或者抑制转录产物的翻译，从而起到转录后调控靶基因表达的作用。miRNA广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，调控生物体生长发育和疾病发生等过程中相关基因的表达。MiRNA的异常表达可能会导致生理状态的异常和疾病的产生，在多种癌症中，其表达水平会发生明显改变，有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外，在许多其他的病变组织和细胞中也检测到了miRNA的异常表达。因此对miRNA的表达的研究具有重要意义。

miRNA的结构较为特殊，其长度只有19-24nt，不能够对其用普通引物进行逆转录，一般可采取两种特殊的miRNA逆转录方法：茎环法和加polyA尾法。在成功逆转录后，根据序列特点直接设计相应的通用引物和特异性TaqMan探针，即可对其进行荧光定量。除常规TaqMan探针以外，用户还可选择设计合成TaqMan-MGB探针，其探针设计得更短，特异性更高。

miRNA逆转录方法示意图  A.茎环法B.加A法