技术概述
大肠杆菌是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌,它不仅具有遗传背景清晰,培养操作简单,转化和转导效率高,生长繁殖快,成本低廉,可快速大规模生产目的蛋白的优点,而且其表达外源基因产物的水平远远高于其他基因表达系统,表达的目的蛋白量甚至能超过细菌中蛋白量的30%,因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。但是也存在一些不足,比如目的蛋白常以包涵体形式表达,产物纯化困难,且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善,表达产物的生物活性较低等,同时基因的表达过程是一个复杂的过程,涉及基因的转录,翻译,翻译后加工,细胞的代谢以及细胞内基因与蛋白,蛋白鱼蛋白之间的互作等。
一个完整的原核表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂,如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑,比如表达量高低,目标蛋白的活性,表达产物的纯化方法等等。
技术详情
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