技术概述
差减文库 ( Subtractive cDNA library) 也称扣除文库、差减cDNA文库、抑制性消减文库(Suppression Subtractive hybridization, SSH)。减法杂交的本质是除去那些普遍共同存在的cDNA序列,从而使欲分离的目的基因的序列得到有效的富集,提高了分离的敏感性。
技术原理:是用两种遗传背景相同或大致相同而功能不同的材料 (如不同因素处理的细胞系或植物的近等基因系等) 提取mRNA (或反转录成 cDNA) ,在一定条件下用大大过量不含目的基因的一方为驱动方(Driver) 与含有目的基因的试验方 ( Tester) 进行杂交 ,选择性地祛除两部分共同基因杂交形成的复合物,将含有相关目的基因的未杂交部分收集后装入载体形成文库。该方法的优点在于将驱动与试验样品中的相同基因排除,而试验样品中的差异基因得到了富集 ( Enrich) 。
技术详情
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做抑制差减杂交SSH都需要买哪些试剂盒