细胞凋亡检测
细胞凋亡(Cell Apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。
细胞凋亡(Cell Apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。
稳定细胞株,一般是将外源DNA克隆到具有某种抗性或选择基因的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的选择标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株。
微生物培养,是指借助人工配制的培养基和人为创造的培养条件(如培养温度等),使某些(种)微生物快速生长繁殖,称为微生物培养。微生物培养可分为纯培养和混合培养,前者是指对已纯化的单一菌种进行培养和利用;
微生物种类繁多,总数庞大,针对不同的微生物对能量、营养和理化条件的需求不同(包括各因子的种类和浓度不同),对现有培养基经过适当的优化改造可以用于新的微生物的分离培养。
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。
耐药细胞株的建立实验是通过细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身生物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp(或P-170)糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受。随着药物浓度的递增,其耐受程度逐渐加强。
将外源基因导入目的细胞,并得到稳定的表达是细胞生物学研究中常用的实验手段。但是,对于特定类型的细胞,电转和脂质体转染往往难以取得理想的效果。使用质量有保证的慢病毒进行感染可以突破此类实验瓶颈。
研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过表达或者沉默该基因,筛选稳定细胞系。针对难转染的干细胞,可以建立标准的转基因技术服务体系,结合高效的慢病毒系统,可以准确地将目的基因和示踪基因转染到目的细胞中,得到稳定表达或沉默特定基因的细胞株。
胚胎干细胞(ESCs)/诱导多能干细胞(iPS cell)诱导生成的指定的细胞,即干细胞诱导分化。胚胎干细胞(embryonic stem cell, ESC)是从早期囊胚的内细胞团(inner cell mass, ICM)分离出来的一种多能细胞系;
干细胞(Stem cell)即起源细胞,是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。在细胞的分化过程中,细胞往往由于高度分化而完全失去了再分裂的能力,最终衰老死亡。
干细胞研发是一项技术性和经验性极强的工作,对于研究者来说是一项长时间、高消耗的投入。很多研究者用几个月甚至几年的时间,投入大量精力和费用,却得不到高质量的干细胞;即使得到干细胞也才仅仅实现了第一步,即建立一个科研工具。
干细胞鉴定主要方法:1、克隆形成率:在细胞实验中克隆形成率是评鉴细胞增殖能力的重要指标,如诱导多能干细胞(iPS)诱导过程中克隆形成率是判定诱导效率的主要指标。
分子量是有机化合物基本的理化性质参数。分子量正确与否往往代表着所测定的有机化合物及生物大分子的结构正确与否。分子量也是多肽、蛋白质等鉴定中首要的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。
免疫组织化学检测,即免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),
在研究分子间相互作用的道路上,人们不断探索,总结出很多方法,免疫技术,晶体衍射,核磁共振等。1948年,荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)理论被首次提出,它可以测定1.0-6.0nm距离内分子间的相互作用。1967年,这一理论得到了实验验证,将1.0-6.0nm的距离称为光学尺。
血管生成(Angiogenesis)是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。许多疾病与血管生成有密切的关系,比如肿瘤。肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程,一般包括血管内皮基质降解、内皮细胞活化、增殖、迁移、管化分支形成血管环和新的基底膜等步骤。
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。
细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。