技术概述
微生物多样性测序,又称扩增子测序,是对特定长度的PCR产物或者捕获的片段进行测序,分析序列中的变异。16S/18S/ITS等扩增子测序即通过提取环境样品的DNA,选择合适的通用引物扩增16S/18S/ITS的某一或某几个区,使用Illumina MiSeq将目的区域正反向读通,通过检测目的区域的序列变异和丰度,对环境样本物种分类及丰度,种群结构,系统进化,群落比较等方面信息进行分析的研究方法。
16S rDNA:是细菌分类学研究中常用的“分子钟”,其序列包含9个可变区(Variable region)和10个保守区(Constant region)。可变区因细菌而异,且变异程度与细菌的系统发育密切相关。通过检测16S rDNA的序列变异和丰度,可以了解环境样品中群落多样性信息。基于16S rDNA的分析在微生物分类鉴定,微生态研究等方面起到重要作用。
18S rDNA测序:18S rDNA是编码真核生物核糖体小亚基rDNA的DNA序列,具有9个保守区域和8个可变区域,对18S rDNA某个高可变区进行测序,用于研究环境微生物中真核微生物的群落结构多样性。系统发育研究中较适用于种级以上阶元的分类。
ITS测序:ITS(Internal Transcribed Spacer)分为两个区域,ITS1和ITS2;ITS1位于真核生物rDNA序列18S和5.8S之间,ITS2位于真核生物rDNA序列5.8S和28S之间;对ITS1或ITS2进行测序,用于研究环境微生物中真菌群落结构多样性。系统发育研究中利用它可研究种及种以下的分类阶元。
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