现阶段测定蛋白质三维结构的方法主要有 X 射线晶体衍射分析,电镜三维重构技术以及核磁共振技术。
核磁共振(Nuclear magnetic resonance)是指原子核在外加恒定磁场作用下产生能级分裂,从而对特定频率的电磁波发生共振吸收的现象。
核磁共振主要步骤如下:
1. 先准备样品,浓缩蛋白质的水溶液(0.21-1mM),如果测1H谱需用D代试剂;
2. 将样品置于外加磁场中,测量共振频率,计算机通过频率得出每一对原子;
3. 核的偶合常数和NOE值,计算对应的原子间距离;
4. 最后构建模型。
(资料来源:蛋白质三级结构的研究方法-魏代玉)