技术概述
胶体金技术是以胶体金作为示踪物来反映蛋白之间的反应情况的一种技术,通过肉眼即可判读检测结果,简单方便,从加样到判读结果一般在10分钟左右。
最经典的胶体金技术为早早孕试纸条检测,采用双抗体夹心法制作。
如图,当阳性尿液从左侧滴加进去后,HCG首先层析到金标抗体处与之特异性结合,再继续流动到第一条红线检测线处。此处包被有抗体,与金标结合物结合的HCG就会被此处抗体特异性地捕获结合形成抗体-抗原-抗体这样的夹心产物并停留在此处。当足够量的结合物在此处聚集后,肉眼能够观测得到一条鲜红的条带,结果就为阳性。
胶体金的应用
胶体金技术既可用于抗原抗体检测,也可用于体内生物活性物质、激素、半抗原等小分子物质的检测。可广泛应用于动物疫病快速诊断和兽药残留快速检测等领域。
1、在畜禽病毒诊断中可检测猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病抗体,此外还能检测犬瘟热、狂犬病、乙型肝炎等多种疫病。
2、在寄生虫病诊断中可检测吸血虫病抗体、弓形虫抗体等疾病抗体。
3、在兽药残留中可检测氯霉素、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、链霉素、四环素等药物。
4、在食品安全中可检测真菌毒素类,例如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2毒素等。
5、在毒品中可检测吗啡、冰毒、K粉等。
胶体金试验流程
1、标记
·用0.2M 碳酸钾调节胶体金溶液ph到待标记蛋白等电点略偏碱位置
·加入一定量标记蛋白混匀
·加入BSA或其他稳定剂封闭胶体金剩余位点,同时给金标提供一个稳定的微环境
·纯化,一般用离心法,是为了去除掉未标记的蛋白以及置换保存液
·干燥,将复溶后的金标蛋白干燥于固相载体上,一般是玻纤纸或聚酯膜
2、包被
将蛋白稀释到一定浓度用点膜仪包被在NC膜上干燥固定
3、组装测试
技术详情
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