技术概述
昆虫表达载体可在昆虫细胞中表达真核基因，有杆状病毒表达载体和果蝇表达载体。
杆状病毒表达载体系统是目前应用最广的昆虫细胞表达系统，在体外基因表达系统被广泛应用[1]，它是利用杆状病毒作为外源基因的载体，通过感染昆虫细胞或者昆虫幼虫来表达外源蛋白的系统[2]。杆状病毒表达载体是以Sf9和Sf21细胞系以及家蚕为表达宿主，将外源基因克隆于转移载体上，与病毒DNA共转染细胞后，经同源重组和筛选而得到重组病毒。杆状病毒将外源基因导入哺乳动物细胞中，外源基因必须在哺乳动物CMV、RSV等启动子启动下才能表达，表达的外源蛋白只有少部分是分泌性，大部分为非分泌性，而杆状病毒基因组能被转导进入哺乳动物细胞中但不能在哺乳动物的细胞中进行复制。杆状病毒表达载体系统主要应用于蛋白质的结构和功能的研究、制备生物杀虫剂、重组蛋白的表达、基因治疗和生产医用蛋白及疫苗等方面[3]。
果蝇表达体系对宿主细胞基因组进行稳定转化的昆虫细胞核基因转化表达系统。以S2细胞为宿主细胞，表达载体上的启动子有Ac5启动子和MT启动子，使蛋白稳定或瞬时高表达，表达载体可以多拷贝整合于宿主细胞基因组，从而提高目的蛋白的表达量，表达载体可以连续表达，也能诱导表达。
技术详情
载体 | 启动子 | 报告基因/标签 | 原核抗性 | 筛选标记 | 备注 |
pAc5.1-EGFP | AC5 | EGFP | 氨苄青霉素 | / | 可供构建 |
pFastBac1 | Polyhedrin | / | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | 可供构建 |
pFastBac1-eGFP | Polyhedrin | EGFP | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | 可供构建 |
pIB-V5-His | OpIE2 | V5，C-His | 氨苄青霉素 | 杀稻瘟菌素 | 可供构建 |
pAcGP67A | Polyhedrin | N-GP67 | 氨苄青霉素 | / | / |
pBacPAK8 | Polyhedrin | / | 氨苄青霉素 | / | / |
pBacPAK9 | Polyhedrin | / | 氨苄青霉素 | / | / |
pBacPAK8-His | Polyhedrin | N-His, N-TEV | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
pFastBac1-Gus | PH | GUS | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
pFastBac-GST-N | Polyhedrin | C-3C, C-GST | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
pFastBac-GST-C | Polyhedrin | N-3C, N-GST | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
pFastBacHTC | 6×His | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / | |
pFastBacHT A | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
PFastBacHT B | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
PFastBacHT C | Polyhedrin | N-His, N-TEV, 6×His | 氨苄青霉素 | 庆大霉素 | / |
pIZ-V5-His | OpIE3 | V5，C-His | 博来霉素 | 博来霉素 | / |
pIZT-V5-His | OpIE2 | V5，C-His | 博来霉素 | 博来霉素 | / |
pIZT-DsRed2-V5-6×His | OpIE-2 | N-Dsred2, C-V5, C-6×His | 博来霉素 | 博来霉素 | / |
载体 | 启动子 | 报告基因/标签 | 原核抗性 | 筛选标记 | 备注 |
pAc5.1-V5-His B | AC5 | V5,C-His | 氨苄青霉素 | / | 可供构建 |
pAc5.1-V5-His A | AC5 | V5 ,C-His | 氨苄青霉素 | / | / |
pAc5-V5-HisA | AC5 | V5 ,C-His | 氨苄青霉素 | / | / |
pMT/BiP/V5-His A | MT | V5 ,6×His | 氨苄青霉素 | 潮霉素 | / |
参考文献
1. 郭广君等. 外源基因表达系统的研究进展[J].科学技术与工程, 2006, 6:582-588
2. 葛菁萍等. 杆状病毒－高效蛋白表达载体[J]. 植物预防兽医学报, 2009, 31: 829-832
3 .孙阳等.昆虫杆状病毒表达系统的研究及其新进展[J].江西农业学报，2006, 18：96-99
4. Expression systems for heterologous proteinproduction[J]. Bio Pharm, 1989, 2:1
5. 张军要等. 中国仓鼠卵巢细胞高效表达系统研究进展[J]. 新乡医学院学报，2010，27：523-526
6. 张国强等. 哺乳动物细胞高效表达载体的优化[J]. 生物技术通讯, 2006, 17: 692-695
7. Khan KH et al.Gene expression in Mammalian cells and its applications[J]. Adv Pharm Bull, 2013, 3: 257-263
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