技术概述
CRISPR Cas9为新型的基因组编辑技术,拥有操作简单,效率高,以及作用靶点多等优势,逐渐成为基因敲除,基因组突变和基因敲除等实验的标准操作工具。Cas9系统能在293T, K562, iPS等多种细胞中,进行有效的靶向酶切,进而引导非同源重组(NHEJ)或同源重组 (HR),效率在3-25%之间。
Cas9载体将编码Cas9蛋白的序列及其附属元件共同制造成为一个单一的载体。同时为了能够让这些组分进入真核细胞的细胞核,还加入了入核信号元件。这样一来,只要只需针对需要编辑的DNA序列合成一段DNA序列,插入这个载体的特定部位。在转入宿主细胞后,产生的人工构建的gRNA就能指导Cas9蛋白切割宿主细胞特定的DNA序列,从而起到基因编辑的作用。
技术详情
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什么是crispr/cas9脱靶效应