技术概述
CLIP,交联-免疫沉淀法,是一种主要用于分离和鉴定细胞中核糖核蛋白复合体中的RNA、microRNA以及蛋白复合物的方法。这个方法可以确定某些RBP是否能与特定的RNA结合并将RBPs与其结合的RNA免疫沉淀下来。
交联-免疫沉淀法(CLIP)及PAR-CLIP技术是让活体细胞被暴露在紫外灯下,使得RNA-蛋白结合起来并且可以用免疫共沉淀的方法使特异性的蛋白以及与其结合RNA一同被分离出来,进一步通过高通量测序鉴定RNA类型。
PAR-CLIP-Seq应用于miRNA靶基因分析能够非常明显地降低miRNA结合位点的假阳性预测频率并且减小miRNA结合位点搜寻空间的范围。可以在全基因组范围内鉴定AGO2蛋白在不同RNA上的结合位点。
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如何预测和鉴定miRNA的靶基因