技术概述
蛋白-蛋白相互作用是蛋白质结构与功能研究中最重要的方面之一。GST pulldown实验是一个有效验证酵母双杂交系统的体外试验技术。将靶蛋白与GST(谷胱甘肽S-转移酶)融合表达,并将靶蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物通过SDS-PAGE电泳分离,或联用WB和MS检测,可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白。
“诱饵蛋白”和”捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。
技术详情
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免疫共沉淀和GST pull down技术各有何优势