技术概述
大肠杆菌是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌，它不仅具有遗传背景清晰，培养操作简单，转化和转导效率高，生长繁殖快，成本低廉，可快速大规模生产目的蛋白的优点，而且其表达外源基因产物的水平远远高于其他基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌中蛋白量的30%，因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。但是也存在一些不足，比如目的蛋白常以包涵体形式表达，产物纯化困难，且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低等，同时基因的表达过程是一个复杂的过程，涉及基因的转录，翻译，翻译后加工，细胞的代谢以及细胞内基因与蛋白，蛋白鱼蛋白之间的互作等。
一个完整的原核表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑，比如表达量高低，目标蛋白的活性，表达产物的纯化方法等等。
技术详情
大肠杆菌（Escherichia coli）表达系统是目前应用最广泛，也是最经济实惠的蛋白表达系统。E. coli具有遗传背景清楚、细胞增殖快、表达量高、稳定性好和抗污染能力强等特点，适用于多种属蛋白的表达，尤其对小分子蛋白的生产具有极大的优势，但也存在一些问题，如易形成包涵体和含有内毒素等。
（1）一站式全流程服务
提供从最前端的密码子优化、载体构建，到中期的蛋白表达，再到后期的纯化及内毒素去除的完整服务链。客户只需提供目标基因序列，即可获得最终的高纯度蛋白产品，无需在不同服务商间周转，省时省力。
（2）深度定制化能力
根据客户对蛋白纯度、活性、内毒素水平等的具体要求，灵活提供包括密码子优化策略、表达载体、纯化标签、去内毒素等在内的附加服务，真正满足客户的个性化项目需求。
（3）丰富的专业经验
拥有大量大肠杆菌系统的可溶性表达、复性及纯化项目经验，尤其擅长处理易形成包涵体、难溶解、易沉淀的“难表达”蛋白，能通过多种技术手段提高复杂蛋白的可溶性和得率，项目成功率高。
（4）强大的资源库储备
备有多种经过工程改造的E. coli细胞株和表达载体，能够为客户的特定目标蛋白快速匹配和优化出最适合的表达方案，确保最佳效果。
（1）基因合成及密码子优化；
（2）提供目的蛋白的序列信息或质粒；
（3）分析并调取基因信号肽，跨膜区；
（4）载体构建：
a.克隆至合适的表达载体；
b.质粒测序；
c.质粒制备；
（5）转化，诱导；
（6）纯化蛋白。
IPTG16℃低温诱导
16℃低温自诱导
16℃ 低温 自诱导 IPTG 16℃ 低温 诱导
16℃ 低温 自诱导 IPTG 16℃ 低温 诱导
p：破菌沉淀；
pre：破菌上清；
after：上柱流出；
5%：5%咪唑洗脱洗杂蛋白
30%：30%咪唑洗脱蛋白
30-2%：30%咪唑第二次洗脱蛋白
100%：100%咪唑洗脱蛋白
100%-2：100%咪唑第二次洗脱蛋白
marker：M:200kd；140kd；105kd；70kd；55kd；40kd；28kd；20kd；13kd；8kd；
gst：gst洗脱蛋白
gst-2：gst第二次洗脱蛋白
marker：M:200kd；140kd；110kd；75kd；55kd；42kd；30kd；23kd；18kd；10kd。
（资料来源：金小峰）
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