昆虫细胞蛋白表达
(Insect & baculovirus protein expression)
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技术概述

昆虫细胞表达系统是四大表达系统(昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统)之一。昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体(Bacmid)上,通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒,提取穿梭质粒 DNA 转染昆虫细胞后得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清浸染昆虫细胞,获得表达的重组蛋白。

杆状病毒是一类闭合环状双链病毒,病毒粒子呈杆状,以昆虫为主要宿主。杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子,在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相当长的时间内不裂解,从而最大限度地保持了外源蛋白的稳定,昆虫细胞表达系统又被称为昆虫杆状病毒系统。

目前研究较多的是苜蓿银纹夜蛾核多角体 (AcNPV) ,其宿主是草地贪夜蛾。而sf9细胞,正是杆状病毒表达系统的宿主细胞之一。sf9细胞属于半贴壁型细胞系,可以进行悬浮培养,也可以进行贴壁培养,在应用于蛋白的表达与制备纯化中,有着许多的优点。

1、与其他真核表达系统相比,外源基因表达水平高,特别是细胞内蛋白。多数情况下,表达的重组蛋白可溶,折叠正确有翻译后修饰(如糖基化等),有生物学活性,容易分离纯化;
2、昆虫细胞悬浮生长,容易放大培养,有利于大规模表达重组蛋白;
3、易于表达异源多聚体蛋白,可通过多种重组病毒同时感染昆虫细胞或用含有多个表达框的一种病毒感染昆虫细胞来实现;
4、安全性。昆虫杆状病毒不感染脊椎动物。

(资料来源:云克隆、强耀生物)

技术详情

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