siRNA合成
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技术概述

siRNA是19-23nt的双链RNA小分子,这种小分子在细胞中首先被一种称为Dicer的RNA酶切割,随后与细胞中的某些酶和蛋白质形成RNA诱导沉默复合体(RNA-induced silencing complexes , RISCs),进而解开双链并通过反义链与细胞内mRNA分子发生特异性结合,导致mRNA分子降解,从而抑制特定基因的表达。RNAi技术已经成为功能基因组学研究的有力工具,如应用在基因敲除、转基因动物、功能基因组等研究、基因治疗及药物研究等方面。

siRNA合成的方法主要包括:
1、化学合成
2、体外转录
3、长片断dsRNA经RNaseIII类降解(如Dicer、E.coli、RNaseIII)
4、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达sirnas
5、pcr制备的siRNA表达框在细胞中表达
前三种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。后两种方法的优点在于不需要直接操作RNA,依赖能够表达siRNAs的DNA载体或者表达框转染到细胞中。每种方法都有有缺点,具体那种方法最好取决于试验目的。

(资料来源:金斯瑞、百度百科)

技术详情

(XXX编辑,XXX修善)

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