技术概述
细胞内蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程有重要影响。例如在许多疾病的发生和发展进程中,常常伴随着某些蛋白质的表达异常。 定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。目前定量蛋白质组学技术主要分为标记(Label)和非标记的(Label Free)定量策略,其中标记策略又分为体内标记(如 SILAC、15^N 标记),以及体外标记(如 iTRAQ、TMT 标记)。
技术详情
MRM(Multiple Reaction Monitoring)是一种研究目标蛋白分子的靶向定量蛋白组学研究方法。MRM基于目标分子的信息,有针对性的选择数据进行质谱数据采集,对于符合目标离子规则的信号进行采集,去除不符合规则的离子信号的干扰。MRM质谱分析经过三个阶段:
1、通过MS筛选出与目标分子特异性一致的母离子;
2、碰撞碎裂这些母离子,去除其他离子的干扰;
3、只对选定的特异MS/MS2离子进行质谱信号的采集。MRM质谱技术是高精准度的蛋白定量鉴定技术,是一次性精准定量研究复杂样品中多个目标蛋白的绝佳方法。如果借助同位素标记的目标肽段作为内参,可以实现蛋白绝对定量鉴定。
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