重组蛋白纯化
2019年6月15日
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重组蛋白纯化主要方法有三种：亲和层析：在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，这种结合既是特异的，又是可逆的， 亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。利用不同的层析柱，采用亲和层析的原理
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重组蛋白纯化主要方法有三种：亲和层析：在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，这种结合既是特异的，又是可逆的， 亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法。利用不同的层析柱，采用亲和层析的原理
大肠杆菌是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌，它不仅具有遗传背景清晰，培养操作简单，转化和转导效率高，生长繁殖快，成本低廉，可快速大规模生产目的蛋白的优点，而且其表达外源基因产物的水平远远高于其他基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌中蛋白量的30%，因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法， 是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay)（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）是于生物体内研究蛋白质与DNA相互作用的方法。其原理是在活细胞或组织的状态下固定蛋白质-DNA复合体，再将染色质DNA随机打断成小片段, 通过目的蛋白的特异性抗体富集与目的蛋白结合的DNA片段。