基因编辑(CRISPR/Cas9)载体构件
2019年6月28日
一条评论
CRISPR Cas9为新型的基因组编辑技术，拥有操作简单，效率高，以及作用靶点多等优势，逐渐成为基因敲除，基因组突变和基因敲除等实验的标准操作工具。Cas9系统能在293T, K562, iPS等多种细胞中，进行有效的靶向酶切，
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CRISPR Cas9为新型的基因组编辑技术，拥有操作简单，效率高，以及作用靶点多等优势，逐渐成为基因敲除，基因组突变和基因敲除等实验的标准操作工具。Cas9系统能在293T, K562, iPS等多种细胞中，进行有效的靶向酶切，
RNA 干扰（RNA interference, RNAi）技术，是将与内源mRNA 编码区同源的小片段（19~23 bp）外源双链 RNA（siRNA）导入细胞中，引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默（knock down）的一种实验技术。
表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。如表达载体pKK223-3是一个具有典型表达结构的大肠杆菌表达载体。
原核表达系统是将外源cDNA片段克隆到原核表达载体上然后转化表达菌株，在原核生物来表达外源蛋白的系统，主要包括大肠杆菌表达、枯草芽孢杆菌表达、链霉素表达等。
差减文库 ( Subtractive cDNA library) 也称扣除文库、差减cDNA文库、抑制性消减文库（Suppression Subtractive hybridization, SSH）。减法杂交的本质是除去那些普遍共同存在的cDNA序列，从而使欲分离的目的基因的序列得到有效的富集，提高了分离的敏感性。
cDNA 文库(cDNA library ): 是指某种生物基因组转录的全部mRNA经反转录产生的cDNA片段分别与克隆载体（常用噬菌体或质粒载体）重组，并将其引入到相应的宿主细胞中（一般为E.coli.）繁殖和扩增，则每个细菌含有一段cDNA，
gDNA文库即基因组DNA（genomic DNA）文库，又称基因组文库（Genomic Library），把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。
拷贝数变异(Copy number variation, CNV)是由基因组发生重排而导致的, 一般指长度为1 kb 以上的基因组大片段的拷贝数增加或者减少, 主要表现为亚显微水平的缺失和重复。CNV 是基因组结构变异(Structuralvariation, SV) 的重要组成部分。
全基因合成 (Gene synthesis)，也称基因合成，即基因人工合成,是重要的基因获取手段之一，是指利用生物化学的方法将人工合成的寡核苷酸拼接成基因的一种技术。
TA克隆(TA cloing)是一种将PCR产物直接连接到T克隆载体的方法。TA克隆技术是利用了Taq聚合酶具有末端转移酶（TdT）活性，但却不具有3’-5’端外切酶校准活性的特点，可在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的dA。
染色体步移(Chromosome walking)，又称为基因组步移（Genome walking），是指由生物基因组或基因组文库中的已知序列出发，逐步探知其旁邻的未知序列或与已知序列呈线性关系的目标序列的方法。
核酸是指DNA和RNA，高质量的核酸是所有分子生物学实验的基础。核酸提取服务可以快速地从动植物组织、细菌、真菌、细胞中提出高质量的DNA或RNA，以用于PCR、分子标记、基因杂交等各种科学研究。
生物信息学（Bioinformatics）是一门交叉科学，它包含了生物信息的获取、加工、存储、分配、分析、解释等在内的所有方面，它综合运用数学、计算机科学和生物学的各种工具，来阐明和理解大量生物数据所包含的生物学意义。
单细胞转录组测序（Single cell RNA sequencing），是在单个细胞水平对mRNA进行高通量测序的一项新技术，针对单个细胞研究其整体水平的基因表达情况，成功解决细胞分子机制研究中常见的细胞异质性、细胞量少而无法进行常规高通量测序等难题。
细胞全基因组测序技术是在单细胞水平对全基因组进行扩增与测序的一项新技术。其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增，获得高覆盖率的完整的基因组之后通过外显子捕获进而高通量测序用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。
特定代谢物含量检测属于靶向代谢组学分析。代谢组学主要研究的是作为各种代谢路径的底物和产物的小分子代谢物（MW<1500）。其样品主要是血浆或者血清、尿液、唾液、以及细胞和组织的提取液，以及细胞和组织的提取液。
脂类化合物通常被定义为自然界中存在的一类难溶于水、易溶于有机溶剂的小分子化合物，是生物体内非常重要的物质。脂类化合物与细胞凋亡、信号传导、疾病感染、免疫功能，以及胎儿代谢缺陷都密切相关，脂类化合物的代谢还与糖尿病、肝癌、肾病、乳腺癌密切相关。
靶向代谢组学（Targeted Metabolomics）是代谢组学研究的重要组成部分，也是全代谢组研究的延伸与拓展。相对于全代谢组分析而言，靶向代谢组分析具有特异性强，检测灵敏度高和定量准确等几个特点。
全代谢组学，又称代谢全谱或非靶向代谢组学分析，采用色谱-质谱联用技术采集样品的代谢谱图，比较不同组样品代谢产物的含量，鉴定差异表达的代谢物，并探索差异代谢物之间的代谢通路。
免疫组库（Immune Repertoire，IR）是指在任何指定时间，某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。免疫组库测序（Immune Repertoire sequencing(IR-SEQ)）是以 T/B 淋巴细胞为研究目标