技术概述
蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究蛋白间相互作用的一种有效技术手段。转录活化蛋白可以和DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA 结合与转录激活的功能是由其上两个相互独立的结构域，即DNA 结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain, AD)共同完成的。
以Gal4 系统为例，BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即”诱饵”相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的AD 则不能与GAL UAS 结合；只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录，从而激活下游报告基因，通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。
（资料来源：酵母双杂实验原理及技术：馥郁小镇、钟鼎生物）
技术详情
（XXX编辑，XXX修善）
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如果手上有比较大量的纯度比较高的蛋白质的话。可以尝试用以下比较直接的方法：1. isothermal titration calorimetry （ITC），直接测定两个蛋白互相作用的Kd值。2. AUC，也就是超速离心分析。可以直接测定两个蛋白相互作用与否。3.SAXS, 也就是X-ray小角散乱。不过技术难度比较大一些。4. 溶液NMR，这个应该可以但不太了解。5. 结晶再解构，这个不用解释了。比较究极一点。6.cryo-EM，同上。比较究级的方法。7. 最简单常用的，gel-filtration，观察有没有oligomer的分子量峰出现。但是相互作用弱的话很难观测到。8.更简单常用的nativePAGE，同上，相互作用弱则很难观测到。9.用氨基架桥试剂共价连接，然后SDS-PAGE。看看有没有oligomer的带。暂时想到这些，跨度比较大。